Ее профессиональная карьера началась, когда она стала принимать участие в различных театральных постановках. Так Дженнифер нарабатывала только опыт, славу они не приносили.
Впервые ее имя было озвучено в титрах, когда на широкий экран вышла картина «Моллой», для Дженнифер эта была малозначительная роль, которая послужила трамплином для больших проектов.
В 1994 году удача улыбнулась Дженнифер Энистон, она попала на кастинг сериала «Друзья». Изначально ее утвердили на роль Моники, однако ее хотела сыграть Кортни Кокс и девушки поменялись ролями. Роль Рэйчел Грин принесла Дженнифер огромную популярность, сериал занимал лидирующие позиции в течение 10 лет. А модные образы и прически героини Энистон стали самыми копируемыми. Дженнифер Энистон получила за роль в сериале «Друзья» премию «Золотой глобус».
Дженнифер Энистон помимо участия в сериале снималась в большом кино, так с участием актрисы вышли такие картины как «Портрет совершенства», «Офисное пространство», «Хорошая девочка».
Однако эти роли, хоть и были оценены критиками по достоинству особого успеха Дженнифер не принесли.
В 2003 году на широкий экран вышла комедия «Брюс Всемогущий», где актриса сыграла супругу главного героя, которого на площадке воплотил Джим Керри. Фильм собрал 485 млн. кассовых сборов в мире.
Также хочется отметить следующие проекты, которые стали успешными. Мелодрама «Развод по-американски» с Винсом Воном, где актеры сыграли супружескую пару, которая была вынуждена развестись вследствие непонимания между супругами.
В 2008 году Дженнифер совместно с Оуэном Уилсоном сыграла в трагикомедии «Марли и я», про пару, которая завела собаку и как она изменила их жизнь.
Энистон вошла в звездный каст мелодрамы «Обещать – не значит жениться», где также приняли участие такие актеры как Бен Аффлек, Дрю Бэрримор, Скарлетт Йоханссон, Брэдли Купер.
Энистон и Адам Сэндлер сыграли в комедии «Притворись моей женой», примечательно, что актеров связывает между собой многолетняя дружба и теплота между ними весьма органично смотрелась на съемочной площадке.
Однако Дженнифер Энистон в следующей картине «Торт» доказала всем, что она является не только хорошей комедийной актрисой, но ей по плечу и драматические роли. В этой картине она сыграла женщину, которая ежедневно борется с хроническими болями, к тому же ее подруга ушла из жизни, покончив жизнь самоубийством.
В 2016 году она вместе с Кейт Хадсон и Джулией Робертс снялась в картине «Несносные леди», это фильм, рассказывающий о том, что же такое женское счастье.
Далее на большой экран вышли с разницей в год две комедии, и снова с участием Энистон и Сэндлера: «Загадочное убийство» и «Убийство в Париже».

В настоящее время актриса принимает участие в сериале «Утреннее шоу», которое вышло на широкий экран еще в 2019 году, сейчас же актриса снимается в четвертом сезоне сериала.

Первым супругом актрисы стал красавчик Брэт Питт, их свадьба состоялась в 2000 году в Малибу. Их считали одной их самых ярких и крепких пар Голливуда, однако в 2005 году они объявили о расставании.
Следующим избранником актрисы стал актер Джастин Теру, их свадьба прошла в 2015 году в Лос-Анджелесе. Но и этот брак не стал крепким, в 2018 году они официально развелись.